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egfp激发光波长

作者:激发光源事业部时间:2019-11-30 18:15:27浏览4380 次

信息摘要:

eGFP是增强型绿色荧光蛋白,由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。eGFP而言,相对于GFP,其荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。增强型GFP或EGFP这款荧光蛋白为单体、明亮、表现良好、无侵入性且几乎不会失效,其已经过反复验证,因此无论您选择何种生物体或应用,EGFP都是最理想的选择。

EGFP--Enhanced green fluorescent protein.

egfp荧光蛋白的激发光波长和egfp荧光波长光谱图如下:

egfp激发光波长

EGFP荧光蛋白的激发光主峰为488nm,EGFP荧光蛋白的荧光波长为510nm。

 

常用的荧光蛋白有哪些?

GFP变体
BFP–Blue-蓝色荧光蛋白
CFP–蓝绿色荧光蛋白
GFP–原绿色荧光蛋白
EGFP–红移激发的增强型绿色荧光蛋白
EYFP–增强型黄色荧光蛋白
PA-GFP–光活性绿色荧光蛋白

非Aequorea victoria水母来源的FP
dsRed–珊瑚源荧光蛋白
mFruits–dsRed突变体
mCherry–常见的红色荧光蛋白
TagRFPs–Evrogen的全光谱FP系列
eqFP611–分离自拳头海葵(Entacmaea quadricolor)
Dronpa–光开关荧光蛋白
EosFP–光转换荧光蛋白


EGFP和GFP荧光蛋白的区别是什么?

eGFP是增强型绿色荧光蛋白,由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。eGFP而言,相对于GFP,其荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。

EGFP为什么是更好的选择?

增强型GFP或EGFP这款荧光蛋白为单体、明亮、表现良好、无侵入性且几乎不会失效,其已经过反复验证,因此无论您选择何种生物体或应用,EGFP都是最理想的选择。
与此相反,如果您需要通过红色通道成像,则mCherry是最理想的选择。众多参考文献中提及了很多红色的FP,但是迄今还没有任何其他FP比mCherry的发表文献数目更多,比mCherry更适合Texas Red滤光片光立方。

BFP蓝色荧光蛋白荧光强度怎么样?

Venus是一种极其明亮的单体黄色FP,但其并不能很好地适应标准的显微镜滤光片组,因此在您使用Venus时难免要在捕捉信号方面耗费很多的精力,尽管该光谱的蓝色末端很具吸引力,但坦白来讲,除非您的靶标丰度超高,否则您不想使用大多数的蓝色FP,这是因为这一类FP所发出的荧光远较EGFP或mCherry微弱。

GFP荧光蛋白表达量很低的原因是什么?

最令人沮丧的事情莫过于,千辛万苦将自己的融合蛋白结构导入到细胞,结果发现GFP表达水平很低甚至没有表达。导致蛋白表达水平很低的因素包括与宿主生物体适应性很差的启动子、靶蛋白融合与GFP折叠的位阻效应,以及多聚体亚单位的表达(注定要在内质网内终止),甚至克隆错误。

如果您是要了解GFP的激发光波长,请点击下面链接:

GFP的激发光波长和GFP的发射光波长

EGFP是GFP突变系

(1)RedShifted(红偏移)GFP突变系(EGFP & GFPS65T)
  色基发生了氨基酸取代,λmax(Excitation)偏移至490nm附近。红偏移突变系的更大激发峰都落在常用滤色片的波长范围内,所以获得的荧光信号要比wtGFP明亮得多。同样,FACS和共焦显微镜的氩离子光源的发射波长为488nm,对RedShifted突变系的激发效率也明显高于wtGFP。EGFP发生了双氨基酸取代,Leu(亮氨酸)取代Phe64(苯丙氨酸),Thr(苏氨酸)取代Ser65(丝氨酸)(Cormack et al.,1996)。基于等量溶解蛋白的光谱分析,由于Em(消光系数)的增加和色基构型的高效率,EGFP在488nm处激发后灯荧光强度为wtGFP的35倍(Cormack et al.,1996;Yang et al.,1996)。在相同条件下(489nm)测得EGFP得Em为53,000cm-1M-1,而wtGFP为9,500CM-1M-1,GFPS65T为55,000cm-1M-1(Patterson et al.,1997)。EGFP的色基构型在37℃比wtGFP或GFPS65T发光效率更高,在这一温度下表达的EGFP可溶性蛋白95%为有效色基(Patterson et al.,1997)。GFPS65T为Thr取代Ser65的突变体(Heim et al.,1995),同样条件下,它的荧光强度强于wtGFP4~6倍,并且其的Redshifted激发峰位于490nm,但37℃时色基形成的效率不如EGFP。

如何快速观察到EGFP在动植物体内的表达?

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 EGFP在烟草上的表达

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LUYOR-3415RG便携式荧光蛋白激发光源

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绿色荧光蛋白在斑马鱼上的表达

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