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GFP荧光蛋白标记的质粒载体激发光和发射光

作者:生命科学事业部时间:2019-11-15 10:32:40浏览708 次

信息摘要:

绿色荧光蛋白(GFP)是一种通用的生物标记,可用于监测生理过程,可视化蛋白质定位并检测体内转基因表达  。GFP可以被488 nm激光线激发,并在510 nm处被更佳检测到。Green Fluorescent Protein (GFP) is a versatile biological marker for monitoring physiological processes, visualizing protein localization, and detecting transgenic expression in vivo. GFP can be excited by the 488 nm laser line and is optimally detected at 510 nm.

绿色荧光蛋白GFP)是一种通用的生物标记,可用于监测生理过程,可视化蛋白质定位并检测体内转基因表达  。GFP可以被488 nm激光线激发,并在510 nm处被更佳检测到。Green Fluorescent Protein (GFP) is a versatile biological marker for monitoring physiological processes, visualizing protein localization, and detecting transgenic expression in vivo. GFP can be excited by the 488 nm laser line and is optimally detected at 510 nm.

EGFP is a basic (constitutively fluorescent) green fluorescent protein published in 1996, derived from Aequorea victoria. It is reported to be a rapidly-maturing weak dimer with moderate acid sensitivity.


为什么GFP发出绿色荧光?
绿色荧光蛋白这种光转换成绿色的光,这是我们实际看到的时候水母亮起。纯化的GFP溶液在典型的室内光线下看起来是黄色的,但是当在户外阳光下拍摄时,它们会发出明亮的绿色。
GFP的作用是什么?
绿色荧光蛋白(GFP)已被广泛用于标记蛋白和研究活细胞中细胞过程的动态变化。
在哪里找到GFP?
Osamu Shimomura首先从海mo Aequorea victoria中分离出GFP,该水母随洋流漂流到北美洲西海岸。
GFP如何发出荧光?
绿色荧光蛋白(GFP)是水母维多利亚水母(Aequorea Victoria)中的一种蛋白,当暴露在光线下时会显示绿色荧光。……在水母中,GFP与另一种称为水母发光蛋白的蛋白质相互作用,当加入钙时会发出蓝光。
如何检测GFP?
转染后24-72小时,可通过荧光显微镜,荧光激活细胞分选(FACS)分析或荧光计测定来检测GFP表达,具体取决于所用宿主细胞系。有一份已发表的报道称稳定的哺乳动物细胞表达GFP。

GFP如何用于基因发现
绿色荧光蛋白(GFP)是使Aequorea victoria的水母蛋白以发光。该蛋白质由单个基因编码。...如果GFP基因正确插入,它可以在水母以外的生物中表达。的GFP基因可被用来作为用于其它的表达的视觉标签基因。
GFP是报告基因吗?
GFP也可以被用作一种定量报道的基因的表达。我们报告说,GFP是通过流式细胞仪测量荧光时单个真核细胞中基因表达的可靠报告者。

GFP和EGFP有什么区别?
GFP和EGFP的区别。GFP和EGFP之间的主要区别是GFP(代表绿色荧光蛋白)是一种蛋白质,当暴露于蓝光时会显示出明亮的绿色荧光,而EGFP(代表增强型绿色荧光蛋白)则比GFP表现出更强的荧光。
GFP的大小是多少?
GFP是由238个氨基酸组成的蛋白质,分子量为27 kDa,呈圆柱状,长度为4.2 nm,直径为2.4 nm。六肽生色团的化学结构已经阐明。

GFP是疏水的还是亲水的?
GFP是可溶的,但包含数段疏水氨基酸。在高盐缓冲液的存在下,蛋白质的三维结构发生变化,从而使蛋白质的疏水区域暴露出来,而亲水区域被屏蔽。
GFP有毒吗?
关于GFP是否对细胞有毒性,存在矛盾的结果。首先,荧光蛋白的聚集会导致细胞毒性。其次,长时间激活GFP可能会产生对细胞有毒的自由基。
什么是GFP质粒?
pGLO 质粒是一种工程化的质粒,在生物技术中用作创建遗传修饰生物的载体。该质粒包含几个报告基因,最的是绿色荧光蛋白(GFP)和氨苄青霉素抗性基因。GFP是从海elAequorea victoria分离得到的。

红色荧光蛋白如何工作?
红色荧光蛋白(RFP)是一种通用的生物标记,可用于监测生理过程,可视化蛋白质定位并检测体内转基因表达。RFP可以被488 nm或532 nm激光线激发,并在588 nm处被更佳检测到。
什么是蓝色荧光蛋白
TagBFP(科学名称mTagBFP)是一种通过TagRFP的位点特异性和随机诱变产生的单体蓝色荧光蛋白 [Subach等。2008]。TagBFP具有明亮的蓝色荧光,更大激发/发射波长为402和457 nm,具有高光稳定性和极高的pH稳定性。
什么是tdTomato
tdTomato是一种非常亮的红色荧光蛋白,比EGFP亮6倍。tdTomato的发射波长(581 nm)和亮度使其非常适合活体动物成像研究。所述tdTomato荧光蛋白是作为耐光如mCherry的。

GFP荧光蛋白的激发光和发射光光谱图:

GFP荧光蛋白的激发光和发射光光谱图

 

常用GFP荧光蛋白的激发波长和发射波长: 

GFP类别GFP Variant激发波长Excitation(nm)发射波长Emission max (nm)
wtGFP395509
GFPuV395509
Stemmer395509
EGFP488509
GFP-S65T489509
Y66H382459
EBFP380460

EGFP质粒图谱:

egfp.png


GFP-LC3质粒图谱

GFP-LC3质粒图谱


img115.jpg


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