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GFP绿色荧光蛋白常见问题解答

作者:荧光激发光源事业部时间:2019-11-24 10:39:12浏览136 次

信息摘要:

绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,简称GFP),是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色萤光。在细胞生物学与分子生物学中,绿色萤光蛋白(GFP)基因常用做报告基因(reporter gene)。绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子)上进行表现,并拿来映证某种假设的实验方法。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达。现在,绿色萤光蛋白(GFP)基因已被导入并表达在许多物种,包括细菌,酵母和其他真菌,鱼(例如斑马鱼),植物,苍蝇,甚至人等哺乳动物的细胞。

GFP的作用是什么?
绿色荧光蛋白(GFP)已被广泛用于标记蛋白和研究活细胞中细胞过程的动态变化。
为什么GFP发出绿色荧光?
绿色荧光蛋白这种光转换成绿色的光,这是我们实际看到的时候水母亮起。纯化的GFP溶液在典型的室内光线下看起来是黄色的,但是当在户外阳光下拍摄时,它们会发出明亮的绿色。
在哪里找到GFP?
Osamu Shimomura首先从海mo Aequorea victoria中分离出GFP,该水母随洋流漂流到北美洲西海岸。
何检测GFP?
转染后24-72小时,可通过荧光显微镜,荧光激活细胞分选(FACS)分析或荧光计测定来检测GFP表达,具体取决于所用宿主细胞系。有一份已发表的报道称稳定的哺乳动物细胞表达GFP(48)。
GFP如何用于研究中?
生物学家利用GFP来学习期间发育过程中的胚胎和胎儿的细胞。生物学家使用GFP作为标记蛋白。...如果细胞产生绿色荧光,科学家推断该细胞也表达靶基因。此外,科学家使用GFP标记特定的细胞器,细胞,组织。

带有GFP的苍蝇

GFP如何在医学中使用?
GFP应用程序。在生物化学和细胞生物学中,研究和开发最深入的蛋白质是绿色荧光蛋白(GFP),该蛋白来自水母维多利亚水母(Aequorea victoria)。...这种荧光标记物可以进行多色标记,并用于研究蛋白质之间的相互作用。
GFP和EGFP有什么区别?
GFP和EGFP的区别。GFP和EGFP之间的主要区别是GFP(代表绿色荧光蛋白)是一种蛋白质,当暴露于蓝光时会显示出明亮的绿色荧光,而EGFP(代表增强型绿色荧光蛋白)则比GFP表现出更强的荧光。
GFP是报告基因吗?
然而,它一般不被接受的是,GFP也可以被用作一种定量报道的基因的表达。我们报告说,GFP是通过流式细胞仪测量荧光时单个真核细胞中基因表达的可靠报告者。
为什么将GFP用作标记?
的GFP基因被广泛用作标记,因为它的非常有用的性质,例如高的稳定性,最小的毒性,非侵入性的检测,并产生绿色光不加入外部的辅因子和不昂贵的设备的应用程序的能力的。

GFP如何用于基因发现?
绿色荧光蛋白(GFP)是使Aequorea victoria的水母蛋白以发光。该蛋白质由单个基因编码。...如果GFP基因正确插入,它可以在水母以外的生物中表达。的GFP基因可被用来作为用于其它的表达的视觉标签基因。
GFP在什么波长发出荧光?
的GFP从A.维多利亚具有在一个主要的激发峰波长为395纳米和在475nm处较小一个。其发射峰是在509纳米,这是在可见光的下部绿色部分光谱。GFP的荧光量子产率(QY)为 0.79。
GFP的大小是多少?
GFP是由238个氨基酸组成的蛋白质,分子量为27 kDa,呈圆柱状,长度为4.2 nm,直径为2.4 nm。六肽生色团的化学结构已经阐明
GFP对细胞有毒吗?
关于GFP是否对细胞有毒性有矛盾的结果。首先,荧光蛋白的聚集会导致细胞毒性。第二,长时间激活GFP可能会产生对细胞有毒的自由基。
如何从水母中提取GFP?
下村(Shimomura)于1960年代首先从水母中提取了发光蛋白,然后分离了带有指示信息的基因。……只要动物具有该基因,它就可以产生GFP-可用于照亮动物的特定部位,例如肌肉细胞或脑细胞回路。
为什么科学家会在水母中寻找荧光基因?
究其原因只有一个部分的水母的细胞焕发了到做与如何每种电池使用的基因,它有。发光的细胞打开了在水母 DNA中自然发现的绿色荧光蛋白(GFP)基因。不发光的细胞使该基因保持关闭状态。
为什么GFP如此值得注意?
为什么GFP如此值得注意?的GFP基因是来自水母Aequorea victoria的,GFP使在紫外光下水母发荧光。...对该质粒进行了基因修饰,以携带gfp和抗药性基因。抗生素抗性基因使直接选择转化细胞成为可能。
为什么水母具有GFP?
GFP对水母图片中经常出现的发光不负责任-“荧光”实际上是由于拍摄果冻时使用的闪光灯的反射所致。在维多利亚水母中,一种称为水母发光蛋白的蛋白质在与钙结合后会释放蓝光。
GFP有多少个BP?
GFP是由238个氨基酸组成的蛋白质,分子量为27 kDa,呈圆柱状,长度为4.2 nm,直径为2.4 nm。六肽生色团的化学结构已经阐明.
GFP是否二聚化?
严格地说,EGFP / GFP具有非共价二聚化的真正不平凡的倾向。这意味着与GFP或另一种荧光蛋白(FP)融合的POI 可能在细胞中形成二聚体。
GFP可溶吗?
维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(GFP)已迅速成为许多生物系统中的标准报道基因。通过定点诱变,我们产生了一种更可溶的密码子修饰的GFP,称为可溶修饰的GFP(smGFP)。
荧光标签如何工作?
通常,荧光标记或标记使用称为荧光团的荧光分子的反应性衍生物。……最常见的标记分子是抗体,蛋白质,氨基酸和肽,它们随后被用作检测特定目标的特异性探针。
什么是GFP融合蛋白?
GFP(绿色荧光蛋白)融合蛋白已用于解决单个细胞以及特定生物体组织中的各种问题。GFP融合蛋白可以瞬时或稳定表达。
什么是增强的绿色荧光蛋白?
的增强型绿色荧光蛋白允许在哺乳动物细胞中的基因转移的灵敏的检测。... 来自水母维多利亚水母的绿色荧光蛋白(GFP)已成为基因表达的重要标志。

GFP激发光和发射光谱

 

GFP对光敏感吗?
维多利亚多管水母,在20世纪60年代用于研究生物发光水母,能够发射的那些生物体的一个光。其生物发光是由于存在水母发光蛋白(对钙敏感)和绿色荧光蛋白(GFP,一种荧光蛋白)。
GFP中的荧光团是什么?
GFP荧光团的形成。……主要的荧光团(通常称为发色团)是由序列中65-67位的丝氨酸,酪氨酸和甘氨酸残基组成的三肽。尽管这种简单的氨基酸基序通常在整个自然界中都可以找到,但通常不会导致荧光。
什么是GFP质粒?
pGLO 质粒是一种工程化的质粒,在生物技术中用作创建遗传修饰生物的载体。该质粒包含几个报告基因,最的是绿色荧光蛋白(GFP)和氨苄青霉素抗性基因。GFP是从海elAequorea victoria分离得到的。
GFP蛋白的预测分子量是多少?
使用GFP时,一级结构为239个氨基酸,总分子量为26,870道尔顿,或26.9 kD。


GFP抗体的常见问题

我应该购买哪些供应商的GFP抗体?
GFP抗体的使用方法是决定供应商的一个重要因素。供应商列出抗体最合适的使用方法,并且给出建议的稀释度。然而,抗体性能可能与系统和实验条件有关。许多供应商提供客户支持服务,这可以就他们公司抗体是否适合您的实验来给出建议。

GFP抗体也是别GFP变体吗?
GFP抗体识别维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria)GFP蛋白的其它变体。

为什么免疫印迹实验中GFP抗体无信号?
免疫印迹实验中的信号缺失可能存在多种问题。转膜失败和转膜效率极差都导致无信号。转膜效率可以通过丽春-S染色进行检测。气泡的存在也会导致转膜效率差。GFP标记蛋白的表达水平可能太低,提高上样体积,并包含阳性对照。抗体浓度非常稀也可能是个问题,多试几个不同浓度的抗体来检测免疫印迹。此外,一个极小的可能性是,GFP标签没有同步表达和不表达也可导致信号缺失。

GFP信号太弱无法成像,是否可以增强信号?
在某些实验条件下,GFP荧光会部分或完全丢失。因此,表达GFP标记蛋白的一些细胞结构可能难以显现或成像。GFP-Booster是骆驼来源的VHH结构域结合蛋白耦合了强信号荧光染料,能稳定并增强荧光信号。


  绿色荧光蛋白(GFP)是来自维多利亚多管发光水母 Aequorea victoria的一个小分子量蛋白质。它是由Osamu Shimomura发现的,当被蓝色到紫外区的光刺激时发出绿色荧光。相关荧光蛋白在许多其它海洋生物中发现,例如珊瑚,海葵和海紫罗兰。GFP非常适合用于蛋白质标记,这是它取得空前成功的更大原因之一。虽然它非常适合实时成像,但是在使用方法中如果导致GFP荧光淬灭,那么就有必要使用抗GFP抗体。组织样品,组织学制剂和使用固定剂的冷冻保存,通常导致GFP荧光完全或部分损失,则需要使用GFP抗体来获得可靠的实验结果。通过免疫印迹检测GFP标签蛋白,免疫沉淀检测蛋白质-蛋白质相互作用,这些实验也必须使用GFP抗体。GFP抗体有多克隆或单克隆抗体,适用于蛋白质印迹,免疫沉淀,免疫组化,免疫细胞化学定位和免疫吸附测定(ELISA),以检测GFP,GFP变体和GFP融合蛋白。

GFP抗体使用量在增长,相应供应商的数量也在增加,有些供应商还提供GFP单结构域抗体或纳米抗体。这些抗体包括一个单一可变抗体结构域,这是一种骆驼来源的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多,而且有重要的用途。 Caussinus E等人已经率先发明deGradFP方法,该方法利用遗传编码方式,具体为在任何真核系统中,快速消耗GFP标签蛋白。此系统依赖于GFP单结构域抗体片段(vhhGFP4)融合到F-box结构域。此融合蛋白结合GFP并直接介导蛋白酶体降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的来源,那么基因功能的分析就不受残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标签蛋白和分子量小、亲和力高的单结构域GFP抗体,在微管,神经元和酵母细胞研究中获得纳米级的分辨率。



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