美国路阳中国公司为客户提供更理想的光源!
021-64195798
153-17565658
热门关键词:B-100AP LUYOR-3415RG
您的位置:首页>>技术应用>>基因科学

植物组织培养的设备和操作方法

作者:生命科学事业部时间:2019-11-10 21:07:02浏览140 次

信息摘要:

植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养,就需要人为创造无菌的环境,使用无菌的器具,同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备,实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。

植物组织培养的设备与使用方法
植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养,就需要人为创造无菌的环境,使用无菌的器具,同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备,实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。

1. 实验室基本组成
(a)无菌操作室
在植物组织培养中,无菌操作室(clean chamber)是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。由于植物组织培养需长时间的无菌操作,所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短,而植物组织培养短的一个月,长的达几年。所以,防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是:干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门,使空气不致流动,以防外界菌及尘埃的侵入;墙壁光滑平整,地面平坦无逢,便于清洁工作;室内安装紫外线灯,以便灭菌,还要有照明装置及灯座,以备临时增加设备之用;室内有超净工作台、便携式激发光源、移动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具、高强度紫外线灯等。面积根据工作性质可大可小,小的无菌操作室一般一间 5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台,分单人使用和双人同时连续作业使用两种。超净台中准备接种用的器具,如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等,以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种,还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜,以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等,也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。无菌室外更好设置预备室作为缓冲间,以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。预备室与无菌室之间更好以玻璃相隔,便于观察和参观。在预备室可放置工作服、鞋、帽等,也需要装自来水和254nm短波紫外线灯

(b) 化学实验室
组织培养中植物材料是生长在人工配制的培养基上,这就需要在化学实验室预先配制好培养基。化学实验室一般由以下几个部分组成:
(1)洗涤室
主要用于培养容器、玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。新购进的玻璃器皿一般先用1%盐酸除去可溶性无机物,再用中性洗涤剂;使用中的玻璃器皿可用洗涤剂清洗,自来水冲洗;对较难洗涤的器皿,如吸管等应用洗液进行洗涤。洗涤室需备有工作台面、上水管和下水管、水池、落水架、电源、干燥箱等。
(2)药品室
用于存放无机盐、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节物质等各种化学药品。要求室内干燥、通风、避免光照。室内设有药品柜、冰箱等设备。各类化学试剂按要求分类存放,需要低温保存的药剂应置于冰箱保存。有毒药品应按规定存放和管理。
(3)称量室
根据需要,配备各类天平。要求干燥、密闭、无直射光照。一般配备 1/100 普通天平和 1/10000 的电子天平,可能的话加配 1/1000 和1/100000 的天平,形成系列。除电源外,应设有防震固定的台座。
(4)培养基配置室
用于配制、分装培养基以及培养基的暂时存放。室内应配有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液器等器具;有平面实验台以及安放药品和器皿的各类药品柜、器械柜、物品存放架;有水浴锅、电饭锅、微波炉、过滤装置、酸度计、分注器以及贮藏母液的冰箱等。
(5)灭菌室
用于器皿、器械、封口材料和培养基的消毒灭菌。要求墙壁耐湿、耐高温。室内需要备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤装置、煤气灶和电炉等。玻璃器皿和小用具的消毒常采用干热灭菌法,150℃约保持 1-3h。培养基、蒸馏水及一些用具,采用 120℃高压蒸汽灭菌法。在没有条件的地方,可将上述工作合并在一个房间内完成,但设备的安装与排列要合理,房间要宽敞、 明亮、通风。
(c)培养室(culture room)是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。需配有固定式培养架、旋转式培养架、转床和摇床、控温控光设备,以满足植物器官(芽、茎、花药等)、愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液体培养的需要。
进行固体培养和试管苗大量繁殖时,培养材料通常摆在培养架上,制作培养架应考虑使用方便、节能、充分利用空间以及安全可靠。培养架材料为金属、铝合金或木制品。隔板可用玻璃板、木板、纤维板、金属板等,更好使用玻璃板或铁丝网,既透光,上层培养物又不受热。为使用方便,通常设计为 5-7 层,更低一层离地面高约 50cm,以上每层间隔 30cm 左右,培养架高约1.7-2.3m。一般在每层上方装置日光灯以供补充光照,培养架长度通常根据日光灯的长度设计。宽度可根据工作情况而定,一般装 2 支日光灯,宽40-50cm。更好使用专门为组织培养设计的节能冷光源,其光谱与日光相近且省电。每日照明时间根据培养物的特性不同而有所区别,一般为 10-16h,更好用自动计时器控制光照时间。
培养室要保持一定的温度条件,大多数情况保持在 20-27℃,要求室内温度均匀一致。室内湿度也要求恒定。为防止培养基的干燥和菌类污染,相对湿度为70%-80%为好。温湿度的保持可用空调机或湿机通过继电器、石英定时开关钟、控温仪等来控制。大多数恒温培养,应根据要求预先调节好。温动变动太大,易使培养材料遭受菌类污染。
培养室应保持整洁。有条件的可装置细菌过滤装置。如需进行液体培养,还应根据培养的种类放置摇床、转床等各种培养装置。转床上的培养瓶不停的转动,瓶内培养物交替地处于液相和气相,保证了良好的通气条件,有利于培养物的生长。有的实验要求暗培养,因此应有暗培养的设备,如柜子或无光培养箱。此外,为避免虫类侵染,培养室应杜绝栽培植物。培养室附近也应尽量避免放置盆花等植物。

(d)细胞学观察室
用于观察、记录培养材料的生长情况及结果。室内要有固定的水磨石或瓷砖台板,以放置显微镜、解剖镜、倒置显微镜及照相设备等仪器。
(e)驯化移栽室
用于试管苗的移栽。通常在温室或塑料大棚内进行。室内备有弥雾装置、遮荫网、移植床等设施;钵、盆、移植盘等移植容器;草炭、蛭石、沙子等移植基质。试管苗移植一般要求温室温度在 15℃-35℃,相对湿度70%以上。

Teak-Tissue-Culture.jpg


2.超净工作台使用
无菌操作应在超净工作台中进行。超净工作台内在都装有一个小电动机,它带动风扇鼓动空气先穿过一个粗过滤器,把大的尘埃滤掉,再穿过一个高效过滤器,把大于0.3µm的颗粒滤掉,然后这种不带真菌和细菌的超净气流吹过台面上的整个工作区域。由高效过滤器吹出来的空气的速度大约是(27±3)m/min,所有的污染物都会被这种超净气流吹跑。只要超净工作台不停的运转,在台面上即可保持一个完全无菌的环境,而且这种气流不会吹灭在台面上使用的酒精灯。为了延长过滤器的使用寿命,超净工作台不要安放在尘埃多的地方,需定期检查超净工作台台面上的风速是很有必要的。在每次开动超净工作台时,应让气流吹 10min 后再开始操作。在每次操作之前,要把实验材料和需使用的各种器械、药品等先放入台内,不要中途拿进。同时台面上放置的东西也不宜太多, 特别注意不要把物件堆得太高,以免挡住气流。在使用超净工作台时应注意安全,当台面上的酒精灯已经点燃以后,千万不要再喷洒酒精消毒台面,否则很易引起火灾。

Agromillora_tissue_culture_lab.jpg

3.无菌操作的步骤
1)将植物组织块放入一个广口玻璃瓶中,加入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液,使材料完全浸没在消毒液中,盖上瓶盖,把玻璃瓶置于超净工作台,在消毒期间不时摇动玻璃瓶。
2)消毒结束后,打开瓶盖,将消毒液倒出,注入适量的无菌蒸馏水(经高压灭菌后),再盖上盖,摇动数次,将水倒掉,如此重复 3-4 次。
3)将材料取出,放在一个已经灭过菌的培养皿中。
4)在对植物材料进行消毒处理的同时,对所要使用的器械进行消毒,先在90%酒精中蘸一下取出,在酒精灯火焰上消毒,然后放在器械架上冷却备用。所有操作器械在每次使用后均需要再用火焰消毒一次。
5)使用消过毒的器械(如解剖刀、解剖针、打孔器、剪刀等)从已经过表面消毒的材料切取适当的外植体。如果需要用解剖镜,应事先用 70%酒精棉擦拭显微镜台表面进行消毒。
6)打开培养容器,将外植体接种到培养基上。如果使用的是玻璃培养容器,把瓶口置酒精灯火焰上烘烤数秒钟,然后迅速用瓶盖或封口膜封严。

 


【植物组织培养的设备和操作方法】链接地址:https://www.luyoruv.com/new3/377.html
未经公司同意,严禁转载我站文章,经同意转载的,必须注明出处。

【相关产品】

返回列表 本文标签: 组织培养